手足口病（HFMD）是由肠道病毒引起的传染病，引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），其中以柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和肠道病毒71型（EV 71）最为常见。现阶段实验室诊断通常以病毒分离培养、血清学检测、分子生物学方法为主。
一、病毒分离培养
利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的“金标准”。HFMD为肠病毒感染引起的疾病，咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、疱疹液以及脑、肺、脾、淋巴结等都是常用分离病原的标本。如果患者出现神经系统症状，可以采集脑脊液标本。标本均需接种到横纹肌瘤细胞（RD）和HEp2（来源于人喉癌上皮细胞）两种细胞系，联合使用上述两种或更多细胞（如Vero细胞）有助于分离到更多的肠道病毒。但是，由于病毒的分离鉴定对技术要求较高、费用较昂贵、耗时，且各实验室分离阳性率各不相同，无法满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要，目前仅用于实验研究。
二、血清学检测
比较患者急性期与恢复期血清中和抗体滴度，可作为肠道病毒感染的血清学诊断方法，最常用的是中和实验，即用微量板法测定抗体滴度，该方法精确且具有型特异性。肠病毒感染后10~20d才可产生IgM，目前检测血清EV71-IgM主要是酶联免疫吸附法，当EV71-IgM滴度≥1：256或急性期与恢复期血清柯萨奇病毒A16型、EV71等肠道病毒中和抗体有4倍以上升高，可诊断为HFMD病例。鉴于HFMD的临床治疗期短，血清学对早期HFMD感染诊断实用价值有限，通常作为回顾性诊断和流行病学调查，为制订防治措施提供依据。
三、分子生物学检测
逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术克服了病毒分离、中和抗体滴度等方法在操作上费时、费力、无法进行快速、早期诊断的缺点，该方法检测标本中的EV71快速、简单、敏感性高，适用于咽拭子、粪便、各种体液及组织中EV71 RNA 的检测，是诊断EV71感染的有效方法。但此法PCR后仍需进行凝胶电泳分析，操作也较为繁琐，同时存在假阴性、早期患者阳性率低以及无法对多种病毒联合检测等不足。
实时荧光PCR（real-time RT-PCR）技术应用与靶序列直接结合的荧光探针可将生产的RNA加以定量，扩增产物可直接定量，在密闭系统防止交叉污染等，具有准确率高、特异性强，快速、廉价等特点，克服了RT-PCR易受污染、耗时长等缺点。通过实时荧光定量RT-PCR 法检测HFMD患儿大便标本中EV71型，方便、快捷，且能报告出病毒载量，适合用于HFMD早期诊断。
基因芯片技术是近年来发展十分迅速的一门微生物诊断技术。该技术是将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息，可视化显色后裸视或借助于普通光学设备对结果分析。其主要优点是可以同时检测多段基因，因此具有较高的灵敏度。同时，应用多组探针联合判断检测结果，也可以有效地降低检测的假阳性率。此外，可以将多种与EV71早期症状类似的病毒点样到芯片上进行联合诊断，对于确诊患者、排除疑似患者具有重要意义。
（市疾控中心 李艳芬）
一、病毒分离培养
利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的“金标准”。HFMD为肠病毒感染引起的疾病，咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、疱疹液以及脑、肺、脾、淋巴结等都是常用分离病原的标本。如果患者出现神经系统症状，可以采集脑脊液标本。标本均需接种到横纹肌瘤细胞（RD）和HEp2（来源于人喉癌上皮细胞）两种细胞系，联合使用上述两种或更多细胞（如Vero细胞）有助于分离到更多的肠道病毒。但是，由于病毒的分离鉴定对技术要求较高、费用较昂贵、耗时，且各实验室分离阳性率各不相同，无法满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要，目前仅用于实验研究。
二、血清学检测
比较患者急性期与恢复期血清中和抗体滴度，可作为肠道病毒感染的血清学诊断方法，最常用的是中和实验，即用微量板法测定抗体滴度，该方法精确且具有型特异性。肠病毒感染后10~20d才可产生IgM，目前检测血清EV71-IgM主要是酶联免疫吸附法，当EV71-IgM滴度≥1：256或急性期与恢复期血清柯萨奇病毒A16型、EV71等肠道病毒中和抗体有4倍以上升高，可诊断为HFMD病例。鉴于HFMD的临床治疗期短，血清学对早期HFMD感染诊断实用价值有限，通常作为回顾性诊断和流行病学调查，为制订防治措施提供依据。
三、分子生物学检测
逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术克服了病毒分离、中和抗体滴度等方法在操作上费时、费力、无法进行快速、早期诊断的缺点，该方法检测标本中的EV71快速、简单、敏感性高，适用于咽拭子、粪便、各种体液及组织中EV71 RNA 的检测，是诊断EV71感染的有效方法。但此法PCR后仍需进行凝胶电泳分析，操作也较为繁琐，同时存在假阴性、早期患者阳性率低以及无法对多种病毒联合检测等不足。
实时荧光PCR（real-time RT-PCR）技术应用与靶序列直接结合的荧光探针可将生产的RNA加以定量，扩增产物可直接定量，在密闭系统防止交叉污染等，具有准确率高、特异性强，快速、廉价等特点，克服了RT-PCR易受污染、耗时长等缺点。通过实时荧光定量RT-PCR 法检测HFMD患儿大便标本中EV71型，方便、快捷，且能报告出病毒载量，适合用于HFMD早期诊断。
基因芯片技术是近年来发展十分迅速的一门微生物诊断技术。该技术是将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息，可视化显色后裸视或借助于普通光学设备对结果分析。其主要优点是可以同时检测多段基因，因此具有较高的灵敏度。同时，应用多组探针联合判断检测结果，也可以有效地降低检测的假阳性率。此外，可以将多种与EV71早期症状类似的病毒点样到芯片上进行联合诊断，对于确诊患者、排除疑似患者具有重要意义。
（市疾控中心 李艳芬）
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