钩端螺旋体病,即钩体病,是世界各地重要的人畜共患病。不仅温血动物,现已证明爬行动物、两栖动物、鱼类、节肢动物、软体动物和蠕虫等亦可自然感染钩体。动物感染此病后,临床表现主要为发热、黄疸、血红蛋白尿、出血性素质、流产、皮肤和粘膜坏死及水肿等症状。钩体病在世界大多数地区都是流行,尤其是气候温暖,雨量较多的热带、亚热带地区,对经济动物养殖业和家畜饲养业的发展及对人的健康都有很大的影响。
生物特性
钩端螺旋体(简称钩体)是一种极难培养且生长缓慢的需氧型革兰氏阴性菌,外形像一根细小的螺旋,在显微镜下观察,新鲜标本可呈旋转或蜿形运动,极为活泼。目前钩端螺旋体属有21个种。可用Korthof培养基培养。与钩体病有关的毒力因子有脂多糖、溶血素、鞭毛蛋白、外膜蛋白等。
二、感染及发病机理
维持宿主间的传播往往是直接接触感染,以及与受感染的尿液、胎盘液或奶接触后感染。此外,感染可以通过和某些宿主经性交或经胎盘进行传播。偶然宿主的感染更多地表现为间接接触传播,通过接触被无临床症状但有钩体经尿液排出的维持宿主尿液污染过的地方而受到感染。环境条件是决定间接传播的重要因素。钩体最喜欢潮湿、适度温暖的气候;在干土或低于10℃或高于34℃的温度下能短暂存活。该微生物可被冷冻、脱水或直射阳光杀死。
钩体在渗透感染的黏膜或破损的皮肤后侵入动物体内。经过一个不定的潜伏期(4~20d)后,钩体会出现在血液中,并经7~10d的血液循环到达许多组织,如肝、肾、肺、生殖道和中枢神经系统中,并在这些地方复制。
三、临床症状
钩体病的临床症状取决于宿主物种、钩体菌株及血清型的致病性以及感染动物的年龄和生理状态。钩体病的亚临床感染很常见,特别是维持宿主在感染后。偶然宿主感染钩体后多表现为急性全身性疾病,经常出现发热,特征性症状为肾或肝或两者功能损伤。此外,钩体还会影响其他机体组织,引发临床疾病,例如胰腺炎、出血、溶血性贫血、肌肉疼痛,或呼吸道疾病。
怀孕的偶然宿主和维持宿主感染钩体后,该病原体会在子宫中定植并持续存在,可能会导致胎儿感染,随后引发流产、死胎、新生动物虚弱,或新生动物虽然健康但受到感染。
四、病原学检查和血清学检查
(一)患者血液的直接镜检
取早期患者血液一滴,加蒸馏水一滴,溶解血细胞后,在暗视野显微镜下检查有无活动的钩体。
(二)病原体分离培养
1.患者血液培养:采集早期患者的血液,无菌操作接种于Korthof或EMJH培养基,28℃培养。每隔5~7d取培养物在暗视野显微镜下观察有无钩体生长,若有生长,即为分离阳性;若未见生长,需继续培养60d,仍不见钩体生长则可作阴性处理。
2.患者尿液培养:接取患者病后两周以上的患者中段尿30~50mL于无菌离心管中,3500~4000r/min离心1h,取沉渣接种于第一管培养基中,剩余的混匀后接种于第二管、第三管中,28℃培养,每隔5~7d取培养物镜检。检查要求与血液培养一样。
3.动物接种:取患者血液1mL或尿液2mL接种金黄地鼠或幼龄豚鼠,进行发病观察和钩体分离。
由于钩体的培养需要专门的培养基,且钩体对环境条件极其挑剔,生长缓慢,所以诊断实验室很少对钩体的样本进行培养。
(三)病原体分群和分型
应用分群血清与新分离的钩体作显微镜凝集试验,确定菌群。应用凝集素交叉吸收试验确定菌型。
(四)钩端螺旋体核酸检测方法
即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术。通过一系列前处理方法提取钩体核酸,利用扩增技术及相关仪器试剂对钩体核酸进行序列扩增。PCR方法可以检测血液、尿液或组织样品中的致病性钩体,但不能确定感染钩体的血清型。血液、尿液或组织标本的培养是可以明确明确感染毒株血清型的唯一方法。
(五)血清学诊断方法
血清学检测法是诊断动物钩体病最常用的技术。其中显微镜凝集试验(MAT)的使用最常见。它包括将血清的适当稀释液与含有该组织中活的钩体流行血清型混合。MAT试验是一种操作和解释都很复杂的检测试验,它需要维持活的钩体培养。
抗体荧光染色可用于确定组织、血液或尿液沉淀物中的钩体。该试验迅速,灵敏度适当,但需要靠熟练的实验室技术人员解释。免疫组织化学是确定经福尔马林固定的组织中钩体的一种非常有用的方法,但因为某些组织中的钩体数量可能较少,因此本试验的灵敏度多变。
五、预防
避免与可能是钩体维持宿主的自由放养的野生动物和家养动物的接触非常困难,因为鼠、浣熊、负鼠、臭鼬经常出现在农村和城市的环境中。钩体病预防的基础是接种多价灭活疫苗。
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