细菌是一种有细胞壁的单细胞生物，属原核细胞。各种细菌在一定的外部环境中都有其固定的形态与结构。而细菌形态结构检查法是利用各种显微镜对细菌形态、基本结构、特殊结构、染色性、排列方式以及数量作直观检查，是细菌学检验中极其重要的手段之一，也是区分细菌最简单的方法。

细菌形态结构检查法就是借助显微镜，对细菌形态、大小、排列、结构进行直接观察。显微镜的发展已有三百多年的历史。随着科学的进步，显微镜各项功能逐渐完善，类型也日渐繁多。目前，根据照明技术、成像技术和特殊功能制造的显微镜就有十多种。而在细菌形态学检查中常用的显微镜有光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜。

一、普通光学显微镜（light microscope）

我们肉眼能看到的最小形象约为0.2mm，而在最佳条件下，以自然光或灯光为光源，在目镜和油镜的组合下可把物体放大1000倍，这样比0.2mm小的微粒就能被人眼所见。

普通光学显微镜由目镜、物镜（低倍镜、高倍镜、油镜）、明视野聚光器、反光镜、光源等光学系统及底座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒、调节器（粗调、微调）等机械系统组成。光学系统用于放大和成像，机械系统起支持和调节作用。

使用普通光学显微镜检查时，先用低倍镜，调暗视野，对准焦距后再转高倍镜检查，切勿压碎玻片。在使用油镜时需要注意先从镜头侧面观察镜头并旋转粗调，当看到镜头和玻片上镜油轻轻接触后将眼睛移到目镜，边观察边用微调调整物像至清晰。此法利于快速找到物像，也可防止镜头与玻片碰触损坏镜头或压碎玻片。普通光学显微镜多用于细菌染色标本的观察，也可在弱光下用于不染色活菌的运动情况观察。

二、暗视野显微镜（dark-field microscope）

暗视野显微镜与普通光学显微镜的基本构造相似，主要差别是聚光器为暗视野聚光器。该聚光器使明光挡住不能直接进入物镜，只能从四周边缘斜射到载玻片上。由于斜射光线不进入物镜，从而形成黑色背景。当斜射光射到标本中菌体时，菌体因光的散射作用而发出亮光，该光进入物镜，使暗背景上呈现出明亮菌体的物象。暗视野显微镜常用于不染色活菌、活螺旋体和弧菌标本检查，通过观察暗背景上明亮物像的形态和运动方式鉴别不同标本。

三、相差显微镜（phase contrast microscope）

暗视野显微镜虽能观察活体标本外形和运动方式，但对菌体内部结构却不能观察到。相差显微镜的成像原理是在普通光学显微镜基础上，再配以环形光阑、具有相位板的相差物镜及辅助设备，可以使光波在穿过标本中密度不同部位时，引起光相的差异。因此，用其观察标本的时候，活细胞的不同结构即可以不同光强度形式显示出来。

用相差显微镜既可观察活体细胞外形和运动方式，又能观察其内部某些细微结构及这些结构的数量。其最大的特点就是可以观察未经染色的标本和活细胞。

四、荧光显微镜（Fluorescence microscope）

荧光显微镜是由普通光学显微镜加上荧光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等附件组成的。原理是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。

每种物质被激发光照射后，在极短的时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一荧光，在物镜后面需加阻断或压制滤光片。按照光路不同，荧光显微镜可分为以下两种：

（一）透射式荧光显微镜：这是比较旧式的荧光显微镜。其激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。优点是低倍镜时荧光强，缺点是随放大的倍数增加其荧光减弱，故对观察较大的标本材料较好。

（二）落射式荧光显微镜：这是近代发展起来的新式荧光显微镜。和透射式荧光显微镜不同的是，其激发光是从物镜向下落射到标本表面的，即用同一物镜照明聚光器和收集荧光。其优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。